ICS 01.040.65 CCS B 04 TB 团 体 标 准 T/ NAIA 098—2021 酿酒葡萄及葡萄酒中有机酸含量的 测定 离子色谱法 Determination of Organic acids Content in Grapes and Wine by Ion chromatography 2021-12- 24发布 2021-12- 31实施 宁夏化学分析测试协会 发 布 全国团体标准信息平台 前 言 本文件按照 GB/T 1.1-2020 《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规 则》的规定编写。 本文件由宁夏化学分析测试协会提出并归口。 本文件起草单位：宁夏农产品质量标准与检测技术研究所、宁夏化学分析测试协会。 本文件主要起草人： 杨春霞、刘霞、王芳焕、李延斌、牛艳、 张小飞。 本文件为首次发布。 全国团体标准信息平台 酿酒葡萄及葡萄酒中有机酸含量的测定 离子色谱法 1　范围 本文件规定了酿酒葡萄及葡萄酒中有机酸含量测定的免试剂离子色谱方法。 本文件适用于酿酒葡萄及葡萄酒中乳酸、乙酸、丙酸、酒石酸、苹果酸、柠檬酸、草 酸、琥珀酸、抗坏血酸 9种有机酸含量的测定。 2　规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版 本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB 5009.157 食品安全国家标准 食品有机酸的测定 GB/T 40179 植物中有机酸的测定 液相色谱 -质谱 /质谱法 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 NY/T 2277 水果蔬菜中有机酸和阴离子的测定 离子色谱法 NY/T 2796 水果中有机酸的测定 离子色谱法 SN/T 4675.5 出口葡萄酒中有机酸的测定 离子色谱法 3　术语和定义 本文件没有界定的术语和定义。 4　原理 样品直接用水稀释或用水提取后，经强阴离子交换色谱柱分离，离子色谱 -电导检测器 测定，以保留时间定性，外标法定量。 5　试剂 除另有说明外，本方法所有试剂均为分析纯，水为电导率小于 18.2 μs/cm的去离子 水。 5.1　酒石酸标准品（ C4H6O6）：纯度≥ 98%。 5.2　苹果酸标准品（ C4H6O5）：纯度≥ 98%。 5.3　草酸标准品（ C2H2O4）：纯度≥ 98%。 5.4　琥珀酸标准品（ C4H6O4）：纯度≥ 98%。 5.5　柠檬酸分析标准品（ C6H8O7）：纯度≥ 98%。 5.6　抗坏血酸分析标准品（ C6H8O6）：纯度≥ 98%。 5.7　乳酸分析标准品（ C3H6O3）：纯度≥ 98%。 5.8　丙酸分析标准品（ C3H6O2）：纯度≥ 95%。 全国团体标准信息平台 5.9　乙酸溶液（ C2H4O2）：纯度≥ 99%。 5.10　1000 mg/L有机酸标准储备液的配制：分别准确称取酒石酸、苹果酸、草酸、柠檬 酸、琥珀酸和抗坏血酸各 10 mg，用水定容至 10 mL容量瓶中，摇匀；分别移取乳酸、丙 酸、乙酸 8.29 μL、10.0 μL和10.0 μL于10 mL容量瓶中，用水 定容、摇匀，于 4 ℃条件下 保存，待用。 5.11　有机酸混合标准工作液 溶液：分别移取 0.05 mL、0.25 mL、0.5 mL、1.0 mL、1.5 mL、2.5 mL、5.0 mL苹果酸、酒石酸、草酸、柠檬酸标准储备液 （5.10）和25 μL、50 μL、75 μL、100 μL、250 μL、500 μL乳酸、乙酸、丙酸标准储备液（ 5.10）于50 mL容量 瓶中，用水稀释至刻度，混匀。混合标准溶液中 苹果酸、酒石酸、草酸、柠檬酸的浓度分 别为 1.0、5.0、10.0、20.0、30.0、50.0、100.0 mg/L，乳酸、乙酸、丙酸 的浓度分别为 0.50、1.0、1.5、2.0、5.0、10.0 mg/L。分别移取 25 μL、0.05 mL、0.5 mL、1.0 mL、1.5 mL、2.5 mL琥珀酸和抗坏血酸混合标准准储备液 （5.10）于50 mL容量瓶中，用水稀释至 刻度，混匀。混合标准溶液中 琥珀酸和抗坏血酸 的浓度分别为 0.5、1.0、5.0、10.0、20.0、 30.0、50.0 mg/L，现用现配。 6　仪器和设备 6.1　离子色谱仪：配有电导检测器，抑制器，高容量阴离子交换柱和保护柱。 6.2　离心机：转速≥ 10000转/分钟，配 5 mL或10 mL离心管。 6.3　组织捣碎机。 6.4　分析天平： 感量 0.01 g和0.0001 g。 6.5　超纯水机。 6.6　净化柱： 包括 On guard-RP 柱、 IC-C 18柱或等效柱。 6.7　注射器： 2.5 mL和5.0 mL。 6.8　0.45 µm水相针式过滤器。 注：所有玻璃器皿使用前均需依次用 2 mol/L氢氧化钾和水分别浸泡 4 h，用水冲洗 3-5次，再用超纯 水冲洗干净，晾干备用。 7　分析步骤 7.1 试样的制备 取酿酒葡萄果粒用 组织捣碎机制成匀浆备用。 7.2 试样的提取及净化 7.2.1 酿酒葡萄：称取酿酒葡萄匀浆液样品 2.00 g~10.00g （精确值 0.01g，根据含量可适当 调整称样量） ，用超纯水稀释 20~50倍。过滤，过 滤液过 On guard-RP 柱，除去色素和果 胶等干扰物。流出液过 0.45 μm水相针式过滤器后上机测定。 7.2.2 葡萄酒样品：取葡萄酒样适量，经冷冻离心（ 10000r/min ，10min，4℃）后，取上 清液稀释 5~20倍，用 IC-C18柱对其净化，净化液用 0.45μ m水相针式过滤器过滤后上机 测定。 固相萃取柱活化： On guard-RP 柱（ 1.0 mL）和IC-C18柱（ 1.0 mL）使用前依次用 5 mL甲醇， 10 mL的超纯水通过，静置活化 30min使之平衡。 全国团体标准信息平台 8　仪器参考条件 8.1　色谱柱： IonPac® AS11-HC （4×250 mm）分析柱， AG11-11C (4 x 50 mm) 保护柱； 或相当者； 8.2　淋洗液流速： 1.0 mL/min。 8.3　分离模式 : 抑制型 -离子交换 -电导检测。 8.4　抑制器：连续自动再生膜阴离子抑制器或等效抑制装置， 抑制器电流 75 mA。 8.5　检测器：电导检测器，检测池温 35.0 ℃。 8.6　柱温： 30.0 ℃。 8.7　进样量： 25 μL。 8.8　淋洗液： 淋洗液自动发生器分别生成 1.5~30 mmol/L 和10~15 mmol/L的氢氧化钾溶 液；见表 1。乳酸、乙酸、丙酸、苹果酸、酒石酸、草酸、柠檬酸 按程序 1分析，琥珀酸 和抗坏血酸 按程序 2分析。 表1 流动相梯度洗脱程序 程序 1 保留时间 /min 0.0 12.0 14.5 17.0 25.0 31.0 31.1 33.0 氢氧化钾浓度 /（mmol·L-1） 0.6 0.6 7.0 14.0 30.0 35.0 1.5 1.5 程序 2 保留时间 /min 0 10 19 19.1 24 - - - 氢氧化钾浓度 /（mmol·L-1） 10.0 10.0 15.0 10.0 10.0 - - - 9　标准曲线的绘制 取（ 5.11）有机酸混合标准工作液溶液， 从低到高浓度依次进样。以各有机酸的浓度 ( x，mg / L) 为横坐标，对峰高或峰面积 ( y) 为纵坐标绘制标准曲线，计算线性回归方程和 相关系数。 （有机酸标准色谱图见附录 A）。 10　测定 将待测液上机测定，根据标准曲线得到待测液中 9种有机酸的浓度，各有机酸的响应值 应在标准曲线范围内，超过线性范围则应稀释后再进样分析。 11　空白试验 除不加试样外，均按上述步骤进行操作。 12　结果计算 试样中有机酸含量按公式（ 1）计算 : ……..........………… （1） 式中： X—酿酒葡萄或葡萄酒中有机酸含量 ，g/kg； Ci —样品中有机酸组分浓度， mg/L;   1000 mfV CCX0 i   全国团体标准信息平台 C0 —空白样品中有机酸组分浓度， mg/L; M —称取样品的质量， g； V —样品稀释定容体积， mL; f —稀释倍数； 计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留三位 有效数字。 13　精密度 在重复性条件下获得的两次独立测试结果的绝对差值不得超过算术平均值的 10%。 14　定量限 方法的定量限为： 酿酒葡萄称样量为 5.0g时，酒石酸 2.5mg/kg 、苹果