ICS 65.020.20 B 05 备案号： 青 DB63 海 省 地 方 标 准 DB63/T 1882—2020 青稞抗条纹病评价技术规范 2020 - 12 - 09 发布 青海省市场监督管理局 2021 - 01 - 01 实施 发 布 DB63/T 1882—2020 前 言 本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件由青海大学农林科学院（青海省农林科学院）提出。 本文件由青海省农业农村厅归口。 本文件起草单位：青海大学农林科学院（青海省农林科学院）。 本文件主要起草人：姚晓华、吴昆仑、姚有华、侯璐、安立昆、白羿雄、李新、李洁。 本文件由青海省农业农村厅监督实施。 I DB63/T 1882—2020 青稞抗条纹病评价技术规范 1 范围 本文件规定了青稞抗条纹病评价技术的术语和定义、病原物接种体制备、实验室接种、抗病性鉴定、 病情分级和抗性评价等要求。 本文件适用于青稞品种（系）和种质资源的条纹病抗性的评价，同时适用于科研教学。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB 4404.1 粮食作物种子 禾谷类 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 抗病性 植物体所具有的能够减轻或克服病原物致病作用的可遗传性状。 3.2 病原物接种体的人工接种 在适宜条件下，通过人工操作将病原物接种体放于植物体感病部位并使之发病的过程。 3.3 分离物 采用人工方法从植物发病部位获得的在特定环境条件下培养的病原物。 3.4 严重度 发病植物单元上发病面积或体积占该单元总面积或总体积的百分率，亦可用分级法表示，即将发病 的严重程度由轻到重划分出几个级别，分别用一些代表值表示，说明病害发生的严重程度。 3.5 1 DB63/T 1882—2020 严重度分级 人为定量植物个体或群体发病程度的数值化描述。 3.6 青稞条纹病 主要由禾内脐蠕孢[Drechslera graminea (Rabenh.ex Schlecht.)Sheom]所引起的叶片出现条纹状病 斑、小穗发白为主的青稞病害。 3.7 典型症状 感病初期，幼苗的第一个叶片上即可表现发病症状，最初有散生的淡黄色小点或短小条纹，有的感 病植株在幼苗时期提前枯死；分蘖前后叶面黄色条纹病斑扩展变长，平行于叶脉，慢慢变成褐色；到拔 节抽穗期，部分品种不能抽穗或弯曲畸形或成白穗，条纹变为赤褐色，周边呈黄色晕圈散开，部分叶片 变黄枯死。青稞品种不同，病斑颜色和宽度略有差异，后期病斑颜色加深呈褐色，湿度大的长出黑色霉 层。 4 4.1 病原物接种体制备 培养基的配制 马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）配方为PDA 26 g，蒸馏水1000 mL，琼脂粉15 g。 4.2 病原物的分离与纯化 取典型感染叶片用蒸馏水冲洗干净后，剪取5 mm×5 mm的病斑，用75%酒精处理30 s， 2%次氯酸钠水 溶液处理30 s，再用灭菌水冲洗3次。滤纸吸干水分后接种在盛有PDA的培养皿中，每个培养皿放置3～4 块病斑，用膜封口，置22 ℃～25 ℃生化培养箱中倒置培养2天～3天，从叶片上挑取未污染的菌丝放入 PDA培养基上培养，转接3次～4次，直至菌落纯化。 4.3 病原物的保存 将纯化好的病原菌接种在PDA的斜面培养基上，培养条件同4.2。待病原菌充分生长后，棉塞部分用 油纸包扎好，移至3 ℃～5 ℃的冰箱中保存。 4.4 接种体的活化 将保存的病原菌转接到PDA培养基上，进行菌种复壮，后选取典型菌苔接种到新的PDA培养基上，培 养条件同4.2。7天后用灭菌打孔器将菌苔打成菌饼，用接种针把菌饼接种到盛有15 mL PDA培养基、直 径为9 cm的无菌培养皿中，封口膜封口，继续培养6天～8天，培养条件同4.2，直至菌苔长满整个培养 皿。 5 5.1 实验室接种 种子预处理 2 DB63/T 1882—2020 待测种子质量符合GB 4404.1规定。将种子用75%酒精处理1 min，蒸馏水冲洗3次，用滤纸吸干水分， 保持种子表皮干燥。 5.2 种子侵染 将预处理好的种子点播在长满菌苔的培养皿中，每个培养皿播50粒，在种子上面覆一层长满菌苔的 培养基，加盖密封后置于6 ℃低温培养箱中暗培养14天～15天，重复3次。 6 抗病性鉴定 6.1 盆栽鉴定 6.1.1 材料种植 采用盆栽鉴定时，选用直径为大于等于20 cm，高度大于等于10 cm的花盆，装耕层土，每盆播种50 粒侵染后的种子，每材料重复3次，置于人工气候培养箱中，20 ℃光照14 h，10 ℃黑暗条件下培养10 h。 每批试验设1个感病对照。 6.1.2 调查方法 按照0级～5级标准调查条纹病，病级及划分标准见表1。播种后20天开始每个材料随机调查50个单 株的发病情况，记载严重度和平均严重程度，调查3次～4次，每次间隔1周，对结果进行校正。 6.2 人工病圃鉴定 6.2.1 材料种植 采用人工病圃鉴定时 ，每个鉴定材料种植1行，行长1 m，行距30 cm，每行播50粒，每隔20个品种 设1个感病对照，随机排列，重复3次。田间管理同大田生产，鉴定圃内不施用任何杀菌剂。 6.2.2 调查方法 30天后开始调查，方法同6.1.2。 7 发病程度记载及标准 7.1 病情分级 病情分级按照国内6级分级标准逐株记载严重度，病级及划分标准见表1。 表1 病级及划分 严重度分级 划分标准 0 叶片正常 1 部分叶片上产生少量小型条形斑点 2 1～2片叶产生条较小面积条纹型斑 3 叶片条形斑面积占叶片总面积的1/2以下 4 叶片条形斑面积占叶片总面积的1/2以上 5 几乎所有叶片都产生条形斑，植株矮化甚至死亡 3 DB63/T 1882—2020 7.2 严重度记载及标准 严重度用分级代表值表示。通过对鉴定材料群体中个体植株发病程度的综合计算，确定各鉴定材料 的平均严重度，调查时每份材料随机抽查50株，计算方法见式（1）： n  S (%)= （Xi  Si）/ i 1 n  Xi ................................ (1) i 1 式中： S——平均严重度 i——病级数（1～n） Xi——病情为i级的单元数 Si——病情为i的严重度值 8 8.1 抗性评价 鉴定有效性判别 当感病对照材料平均严重程度达到其相应感病程度时，该批次抗条纹病鉴定视为有效。 8.2 抗性评价标准 依据鉴定代理的平均严重度分级评价其抗性水平，评价标准见表2。 表2 8.3 青稞对条纹病抗性的评价标准 平均严重度 抗性 0 免疫 0＜平均严重度＜2.0 抗病 2.0≤平均严重度＜3.0 中抗 3.0≤平均严重度＜4.0 中感 4.0≤平均严重度 高感 重复鉴定 平均严重度为3.0以下的材料，将进行2～3次重复鉴定，才能鉴定为抗病材料。鉴定方法同6。 8.4 抗性评价 根据2～3次抗性鉴定结果对鉴定材料进行抗病性评价，抗性以记载的最高病情级别为准。 9 鉴定记载表格 青稞抗条纹病鉴定记录级结果记载表格见附录A。 4 DB63/T 1882—2020 附 录 A （资料性） 青稞抗条纹病鉴定原始记录级结果记载表 表A.1给出了青稞抗条纹病鉴定原始记录及结果记载表。 表A.1 编号 品种名称 _年青稞抗条纹病鉴定原始记录及结果记载表 调查批次 严重度及调查株数 0 1 2 3 平均严重度 4 5 Ⅰ Ⅱ 1 Ⅲ Ⅳ Ⅰ Ⅱ 2 Ⅲ Ⅳ Ⅰ Ⅱ 3 Ⅲ Ⅳ Ⅰ Ⅱ 4 Ⅲ Ⅳ Ⅰ Ⅱ 5 Ⅲ Ⅳ 鉴定地点___________________ 接种日期___________________ 接种株系编号___________ 播种日期___________________ 调查日期：第Ⅰ次___________ 第Ⅱ次_________________ 第Ⅲ次___________ 第Ⅳ次_________________ 鉴定计算负责人（签字）： _________________________________ 5