ZHEJIANG MADET/ZZB 0404 —2018 I 前 言 本标准按照GB/T 1.1 —2009给出的规则起草。 本标准由浙江省品牌建设联合会提出并归口。 本标准由绍兴市质量技术监督检验院牵头组织制定。 本标准主要起草单位：浙江医药股份有限公司。 本标准参与起草单位：浙江医药股份有限公司新昌制药厂、绍兴市质量技术监督检测院（排名不分 先后）。 本标准主要起草人：求子勤、吴建江、晁红娟、杜锡勇、黄行舟、许新德、张利英、温善萍、吕少 风、王建刚、吕红、李晶晶、蒙雅娟。 本标准由绍兴市质量技术监督检测院负责解释。 ZHEJIANG MADET/ZZB 0404 —2018 1 食品添加剂 叶黄素 1 范围 本标准规定了食品添加剂叶黄素的基本要求、技术要求、试验方法、检验规则、标签、包装、运输 和贮存、质量承诺等。 本标准适用于以万寿菊（ Tagetes erecta L .）油树脂为原料，经皂化、提取精制而成的食品添加 剂叶黄素。 分子式：C 40H56O2 相对分子量：568.88（按 2016年国际相对原子质量） 结构式： OH HO 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。 凡是注日期的引用文件， 仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 5009.3 —2016 食品安全国家标准 食品中水分的测定 GB 5009.4 —2016 食品安全国家标准 食品中灰分的测定 GB 5009.11—2014 食品安全国家标准 食品中总 砷及无机砷的测定 GB 5009.12—2017 食品安全国家标准 食品中铅的测定 GB 5009.27 植物油中多环芳烃的测定 气相色谱 -质谱法 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 8170 —2008 数值修约规则与极限数值的表示与判断 GB 26405 —2011 食品添加剂 叶黄素 GB 29924 食品安全国家标准 食品添加剂标识通则 GB/T 30642 食品抽样检验通用导则 3 基本要求 3.1 原料要求 主要原料万寿菊（ Tagetes erecta L. ）油树脂应符合附录A 的要求。 3.2 生产工艺和设备 3.2.1 生产工艺应使用乙醇为溶剂，采用碱液水解、反应- 结晶、离心或过滤、干燥及粉碎等工序。 ZHEJIANG MADET/ZZB 0404 —2018 2 3.2.2 应采用一步结晶法，反应和结晶在同一工序完成。 3.2.3 应配备反应- 结晶设备系统、晶体分离设备系统、真空干燥设备系统及粉碎设备系统。 3.3 检测能力 3.3.1 应配备紫外- 可见分光光度计、高效液相色谱仪、气相色谱仪、原子吸收分光光度计等设备。 3.3.2 应具备总类胡萝卜素含量、叶黄素含量、玉米黄质含量、其他单一杂质、干燥失重、灰分、正 己烷、乙醇、铅、总砷等项目的检验能力。 4 技术要求 4.1 感官要求 应符合表1 的规定。 表1 感官要求 项目 要求 检验方法 色泽 桔黄色至桔红色 取适量样品置于清洁、干燥的白瓷盘中，在自然 光线下，观察其色泽和组织状态。 组织状态 粉末 4.2 理化指标 应符合表2 的规定。 表2 理化指标 项目 指标 总类胡萝卜素，ω/％ ≥80.0 叶黄素，ω/％ ≥74.0 玉米黄质，ω/％ ≤8.5 其他单一杂质（占总类胡萝卜素），％ ≤1.0 干燥失重，ω/％ ≤1.0 灰分，ω/％ ≤1.0 正己烷/ （mg/kg） ≤50 乙醇/（mg/kg） ≤500 铅(以Pb计)/（mg/kg） ≤1.0 总砷(以As计)/（mg/kg） ≤3.0 苯并（α）芘/（μ g/kg） ≤2.0 5 试验方法 5.1 一般要求 实验用水应符合GB/T 6682的规定，试验中所用溶液在未注明何种溶剂配制时，均指水溶液。 5.2 鉴别 ZHEJIANG MADET/ZZB 0404 —2018 3 5.2.1 在5.4测定总类胡萝卜素含量试验中，试样液在 446 nm附近有最大吸收，且 A446 nm/A474 nm应为 1.09～1.14。(A 446 nm指试样液在 446 nm处的吸收值；A 474 nm指试样液在 474 nm处的吸收值 ) 5.2.2 在测定叶黄素含量试验中，试样液在液相色谱图中的主峰保留时间应与标准溶液中叶黄素的保 留时间相同，标准溶液和试样液分别按 GB 26405 —2011中A.4.4.1和A.4.4.2规定的方法配制。 5.3 感观检验 按GB 26405—2011中 3.1规定执行。 5.4 总类胡萝卜素含量 按GB 26405—2011中 A.3规定执行。 5.5 叶黄素和玉米黄素含量 按GB 26405—2011中 A.4规定执行。 5.6 其他单一杂质 样品处理和测定按GB 26405 —2011中A.4规定执行，结果计算按公式（1 ）计算： 100× = tv RRX ...................................... (1) 式中： X ——样品中单一杂质含量； R V ——色谱图中单一峰面积值； R T ——样品溶液中除溶剂峰外的所有峰的峰面积之和。 5.7 干燥失重 按GB 5009.3—2016中的第二法规定执行。 5.8 灰分 按GB 5009.4—2016中的第一法规定执行。 5.9 正己烷、乙醇和甲醇 5.9.1 仪器和设备 气相色谱仪，带氢火焰离子检测器（FID ）和顶空进样器。 5.9.2 参考色谱条件 5.9.2.1 色谱柱：DB -624毛细管柱，30m ×0.53mm，膜厚3.0µm；或其他等效色谱柱。 5.9.2.2 载气：氦气或氮气。 5.9.2.3 载气流量：3.0 mL/min 。 5.9.2.4 进样口温度：220 ℃。 5.9.2.5 柱温：40 ℃，保持 3min，以3.5℃/min升至65℃，再以 20℃/min升至220℃，保持 5 min。 5.9.2.6 检测器温度：235 ℃。 5.9.2.7 进样体积：1 mL 定量环。 ZHEJIANG MADET/ZZB 0404 —2018 4 5.9.2.8 分流比：3 ：1。 5.9.3 顶空条件 5.9.3.1 顶空瓶温：80℃ 。 5.9.3.2 定量环温度：85℃ 。 5.9.3.3 传输线温度：100℃ 。 5.9.3.4 顶空瓶平衡时间：40.0min 。 5.9.3.5 气相循环时间：30.0min。 5.9.3.6 加压时间：0.2min 。 5.9.3.7 定量环填充时间：0.2min 。 5.9.3.8 定量环平衡时间：0.05min 。 5.9.3.9 进样时间：1.0min 。 5.9.3.10 顶空瓶压力：13.8psi 。 5.9.4 分析步骤 5.9.4.1 对照溶液制备 5.9.4.1.1 对照溶液 1：精密吸取 1.5 µL正己烷于 100 mL容量瓶，用二甲基甲酰胺（DMF ）稀释至刻 度，摇匀，吸取 25.0 mL至50 mL容量瓶，用 DMF定容，此为对照液 1。（该对照液中正己烷浓度约为 5.0 μg/mL）。 5.9.4.1.2 对照溶液 2：精密吸取 12.5 µL乙醇于100 mL容量瓶，用二甲基甲酰胺（DMF ）稀释至刻 度，摇匀，吸取 25.0 mL 至50 mL容量瓶，用 DMF定容，此为对照液 2。 （该对照液中乙醇浓度约为 50.0 μg/mL）。 5.9.4.1.3 对照溶液 3：精密吸取 0.5 µL甲醇于100 mL容量瓶，用二甲基甲酰胺（DMF）稀释至刻度， 摇匀， 吸取 25.0 mL至100 mL容量瓶， 用 DMF定容， 此为对照液 3。 （该对照液中甲醇浓度为 1.0 μg/mL） 。 5.9.4.1.4 灵敏度溶液配制：吸取各对照液 1.0 mL于10 mL容量瓶，用 DMF定容，摇匀。（灵敏度溶 液中正己烷浓度约为 0.5 ug/mL，乙醇浓度约为 5.0 ug/mL，甲 醇浓度约为 0.1μg/mL）。 5.9.4.2 样品溶液制备 称取约300 mg （精确至0.1 mg ）试样，置于10 mL顶空瓶，加3.0 mL DMF 稀释，摇匀。 5.9.4.3 系统适应性要求 取上述5.8 .4.1对照溶液3.0 mL于10 mL顶空瓶，连续进6 针，主峰理论板数应不小于5000，峰面积 RSD应不大于 10.0％，灵敏度溶液中主峰信噪比应不小于3 。 5.9.5 结果计算 用外标法计算样品中的正己烷和乙醇含量，以正己烷、乙醇质量分数 w 3计，数值以毫克每千 克 （mg/kg）表示， 按下式计算： 6 3 10×××= X RR X C AC Aw ................................... (2) 式中： A X ——样品溶液中正己烷、乙醇或甲醇的峰面积的数值； ZHEJIANG MADET/ZZB 0404 —2018 5 C R ——对照液中正己烷、乙醇或甲醇的浓度的数值，单位为毫克每毫升（mg/m L）； A R ——对照液中正己烷、乙醇或甲醇的峰面积的数值； C X ——样品溶液的浓度的数值，单位为毫克每毫升（