ICS 65.120 B 25 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 2548—2014 饲料中黄曲霉毒素B的测定 时间分辨 荧光免疫层析法 Determination of aflatoxin B, in feed-Time-resolved fluorescent immunochromatographic method 行业标准信息服务平台 2014-03-24发布 2014-06-01实施 中华人民共和国农业部发布 NY/T 2548—2014 前言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准由中华人民共和国农业部提出并归口。 本标准起草单位：中国农业科学院油料作物研究所、农业部油料及制品质量监督检验测试中心。 本标准主要起草人：李培武、丁小霞、唐晓倩、张奇、张文、王督、姜俊、周海燕、张兆威。 行业标准信息服务平台 I NY/T2548—2014 饲料中黄曲霉毒素B，的测定时间分辨荧光免疫层析法 1范围 本标准规定了时间分辨荧光免疫层析法测定饲料中黄曲霉毒素B，的方法。 本标准适用于饲料和饲料原料中黄曲霉毒素B的测定。 本标准黄曲霉毒素B,检出限为0.30μg/kg。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3原理 试样中黄曲霉毒素B与销乳胶标记的特异性抗体发生结合后，抑制了层析过程中抗体与硝酸纤维 素膜检测线上黄曲霉毒素B-BSA偶联物的免疫反应，使检测线时间分辨荧光强度降低，通过检测时间 分辨荧光强度变化进行定量测定。 4试剂 除非另有规定，仅使用分析纯试剂。 4.1水，按照GB/T6682中的要求，二级。 4.2甲醇(CH,OH)。 4.3蔗糖(C12H22On)。 4.4牛血清白蛋白（BSA),纯度大于98%。 4.5吐温-20(C58H114O26）。 4.670%甲醇溶液：取70mL甲醇（4.2），加30mL水（4.1)，混勺。 4.7样品稀释液：取1.0g蔗糖（4.3）、0.5g牛血清白蛋白（4.4)和2.5g吐温-20（4.5)，溶解于 100.0 mL水(4.1)中。 4.8销标记黄曲霉毒素B抗体溶液：黄曲霉毒素B,抗体纯度80%以上，亲和力常数不低于1.00×10 L/mol。黄曲霉毒素B,抗体与黄曲霉毒素B2、黄曲霉素G,、黄曲霉素G2交叉反应率小于10%。 4.91000ng/mL黄曲霉毒素B标准溶液。 4.10100ng/mL黄曲霉毒素B标准储备液：准确吸取黄曲霉毒素标准溶液（4.9)1mL于10mL容量 瓶中，甲醇定容。4℃可保存3个月。 警告： 由于黄曲霉毒素毒性很强，试验人员应注意自我保护。操作时，应避免吸入、接触黄曲霉毒素标准溶液。标准溶液 配置应在通风橱内进行，工作时应戴眼镜、穿工作服、戴医用乳胶手套。凡接触黄曲霉毒素的容器，需浸入10%次氯酸 钠溶液12h以上。同时，为了降低接触黄曲霉毒素的机会，本标准鼓励直接购买并使用黄曲霉毒素的有证标准储备液。 5仪器设备与材料 5.1时间分辨荧光检测仪：能在激发波长为（365土5）nm，检测波长为（615土5）nm条件下测定。 1 NY/T 2548—2014 5.2黄曲霉毒素时间分辨荧光免疫层析装置（图1)：固定有黄曲霉毒素一BSA偶联物，检测灵敏度不 低于0.1ug/kg，用于样品中黄曲霉毒素与标记抗体预反应后再与黄曲霉毒素一BSA偶联物反应的 载体。 (a)正视图 (b)侧视图 说明： 一底板； 一样品垫； 2———吸水垫； 5—质控线； 一硝酸纤维素膜； 6——检测线。 图1黄曲霉毒素免疫层析装置示意图 5.2.1黄曲霉毒素—BSA偶联率为(1：5)～(1：20)(BSA：AFB)。 5.2.2样品垫：玻璃纤维、聚酯纤维或纸质薄片。 5.2.3硝酸纤维素膜：4cm毛细时间不小于135s。 准信息服务平台 5.2.4吸水纸。 5.2.5底板。 5.2.6连接胶带。 5.3均质机，转速大于等于20000r/min。 5.4分析天平：感量0.1g。 5.5分样筛、20日。 5.6恒温装置：温控范围为（37.0士2.0)℃。 5.7漩涡混合器。 5.8微量移液器：1μL~10μL,10μL~100μL,100μL~1000μL。 5.9中速定性滤纸。 5.10净化柱：3mL硅胶SPE柱。 5.11铕乳胶：荧光寿命≥600μs。 2 NY/T 2548—2014 5.2黄曲霉毒素时间分辨荧光免疫层析装置（图1)：固定有黄曲霉毒素一BSA偶联物，检测灵敏度不 低于0.1ug/kg，用于样品中黄曲霉毒素与标记抗体预反应后再与黄曲霉毒素一BSA偶联物反应的 载体。 (a)正视图 (b)侧视图 说明： 一底板； 一样品垫； 2———吸水垫； 5—质控线； 一硝酸纤维素膜； 6——检测线。 图1黄曲霉毒素免疫层析装置示意图 5.2.1黄曲霉毒素—BSA偶联率为(1：5)～(1：20)(BSA：AFB)。 5.2.2样品垫：玻璃纤维、聚酯纤维或纸质薄片。 5.2.3硝酸纤维素膜：4cm毛细时间不小于135s。 准信息服务平台 5.2.4吸水纸。 5.2.5底板。 5.2.6连接胶带。 5.3均质机，转速大于等于20000r/min。 5.4分析天平：感量0.1g。 5.5分样筛、20日。 5.6恒温装置：温控范围为（37.0士2.0)℃。 5.7漩涡混合器。 5.8微量移液器：1μL~10μL,10μL~100μL,100μL~1000μL。 5.9中速定性滤纸。 5.10净化柱：3mL硅胶SPE柱。 5.11铕乳胶：荧光寿命≥600μs。 2 NY/T 2548—2014 5.2黄曲霉毒素时间分辨荧光免疫层析装置（图1)：固定有黄曲霉毒素一BSA偶联物，检测灵敏度不 低于0.1ug/kg，用于样品中黄曲霉毒素与标记抗体预反应后再与黄曲霉毒素一BSA偶联物反应的 载体。 (a)正视图 (b)侧视图 说明： 一底板； 一样品垫； 2———吸水垫； 5—质控线； 一硝酸纤维素膜； 6——检测线。 图1黄曲霉毒素免疫层析装置示意图 5.2.1黄曲霉毒素—BSA偶联率为(1：5)～(1：20)(BSA：AFB)。 5.2.2样品垫：玻璃纤维、聚酯纤维或纸质薄片。 5.2.3硝酸纤维素膜：4cm毛细时间不小于135s。 准信息服务平台 5.2.4吸水纸。 5.2.5底板。 5.2.6连接胶带。 5.3均质机，转速大于等于20000r/min。 5.4分析天平：感量0.1g。 5.5分样筛、20日。 5.6恒温装置：温控范围为（37.0士2.0)℃。 5.7漩涡混合器。 5.8微量移液器：1μL~10μL,10μL~100μL,100μL~1000μL。 5.9中速定性滤纸。 5.10净化柱：3mL硅胶SPE柱。 5.11铕乳胶：荧光寿命≥600μs。 2 NY/T 2548—2014 5.2黄曲霉毒素时间分辨荧光免疫层析装置（图1)：固定有黄曲霉毒素一BSA偶联物，检测灵敏度不 低于0.1ug/kg，用于样品中黄曲霉毒素与标记抗体预反应后再与黄曲霉毒素一BSA偶联物反应的 载体。 (a)正视图 (b)侧视图 说明： 一底板； 一样品垫； 2———吸水垫； 5—质控线； 一硝酸纤维素膜； 6——检测线。 图1黄曲霉毒素免疫层析装置示意图 5.2.1黄曲霉毒素—BSA偶联率为(1：5)～(1：20)(BSA：AFB)。 5.2.2样品垫：玻璃纤维、聚酯纤维或纸质薄片。 5.2.3硝酸纤维素膜：4cm毛细时间不小于135s。 准信息服务平台 5.2.4吸水纸。 5.2.5底板。 5.2.6连接胶带。 5.3均质机，转速大于等于20000r/min。 5.4分析天平：感量0.1g。 5.5分样筛、20日。 5.6恒温装置：温控范围为（37.0士2.0)℃。 5.7漩涡混合器。 5.8微量移液器：1μL~10μL,10μL~100μL,100μL~1000μL。 5.9中速定性滤纸。 5.10净化柱：3mL硅胶SPE柱。 5.11铕乳胶：荧光寿命≥600μs。 2