ICS67.140.20 B35 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T3012—2016 咖啡及制品中葫芦巴碱的测定 高效液相色谱法 Determination of trigonelline in coffee and its products- High performance liquid chromatography 行业标准信息服务平台 2016-11-01发布 2017-04-01实施 中华人民共和国农业部 发布 NY/T3012—2016 前 言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由农业部农垦局提出。 本标准由农业部热带作物及制品标准化技术委员 本标准起草单位：云南省农业科学院质量标准与检测技术研究所、农业部农产品质量监督检验测试 中心（昆明）、农业部农产品质量安全风险评估 本标准主要起草人 刘宏程 邹艳虹。 2 服务平台 NY/T3012—2016 咖啡及制品中葫芦巴碱的测定 高效液相色谱法 1范围 本标准规定了咖啡及制品中葫芦巴碱含量的高效液相色谱测定方法。 本标准适用于生咖啡、烘焙咖啡、速溶咖啡中葫芦巴碱的测定。 本方法的定量测定范围为0.002g/100g~1g/100g，方法的检出限为0.001g/100g，方法的定量 限为0.002g/100g。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 NY/T1518袋装咖啡取样 3原理 试样中葫芦巴碱用沸水提取，沉淀蛋白，过滤，用配有紫外检测器的高效液相色谱仪测定，外标法 定量。 4试剂和材料 除另有说明外，水为GB/T6682规定的一级水。 4.1试剂 4.1.1甲醇（CH.OH.CAS:67-56-1)：色谱纯。 4.1.2乙睛(CHON,CAS:75-05-8)：色谱纯。 4.1.3磺基水杨酸（CHO.S·2H,O.CAS:5965-83-3）：分析纯。 4.1.4标准品：葫芦巴碱标准品（CHON.CAS：535-83-1）：纯度98%。 4.2标准溶液配制 4.2.1磺基水杨酸溶液：称取磺基水杨酸5.00g水溶解后定容至100mL。 4.2.2葫芦巴碱标准储备溶液：称取葫芦巴碱50mg（精确至0.1mg），置于10mL烧杯中，水溶解后转 移到25mL容量瓶中定容至刻度，配制成质量浓度为2000mg/L标准储备液。该储备液在4℃冰箱避 光条件下，有效期6个月。 4.2.3葫芦巴碱标准工作溶液：分别吸取适量的标准储备溶液.用水稀释质量浓度分别为1.0mg/L、 2.0mg/L、5.0mg/L、10.0mg/L、20.0mg/L和50.0mg/L的混合标准工作溶液。该标准工作溶液 4℃冰箱避光条件下，有效期1个月。 5仪器设备和器具 5.1高效液相色谱仪：带紫外检测器 5.2分析天平：感量0.1mg和0.01g。 NY/T3012—2016 5.3超声波清洗器。 5.4容量瓶：25mL,100mL。 5.5针头过滤器：孔径为0.45μm，水相的滤膜。 5.6咖啡磨。 5.7嵌齿轮磨。 5.8样品筛，孔径为630μm。 6 试样制备与保存 6.1试样制备 取样按照NY/T1518的规定执行 用5.6 筛为止，混匀，装人密闭容器中。 6.2试样保存 样品于室温下保 RESE 7试验步骤 7.1提取 称取试样0. 其中生 啡为0.2g.精确到0.01g于100mL烧杯中.加 PPY 沸水。盖表面 5g 沸提取 血，置于电热板 上煮 min，冷地至室温转移到100mL容量瓶中，加人 基水杨酸溶液， 摇匀，水定容至刻度 收集滤液工木 液用水相 工机测定 7.2测定 7.2.1色谱参考条 件 色谱柱：氨基柱 （长度） 粒径 260nm；柱 温：30℃；进样量 流速 7.2.2色谱分析 分别取标准 容和试样提取 高效液相色谱仪，以标准 加 宇液 对质量浓度 绘制标准工作曲线 作曲线比较定量或以单 液的峰 校 定量。 7.2.3空白试验 除不加待测样品外 进行操作。 8结果计算 试样中葫芦巴碱含量以质量分数计，按式 计算 XAXAX 服务平台 (1) 式中： 试样中葫芦巴碱的含量，单位为克每百克（g/100g）； w Ci 标准溶液浓度，单位为毫克每升（mg/L）； Vi 试样溶液定容体积，单位为毫升（mL）； V2 标准溶液进样体积，单位为微升（μL)； V3 试样进样体积，单位为微升（μL）； A; 标准溶液峰面积； A2 试样溶液峰面积； m 试样质量，单位为克（g）； 2 NY/T3012—2016 10000—换算系数。 计算结果保留3位有效数字。 9 精密度 在重复条件下同一样品获得的测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的15%。 10 参考色谱图 葫芦巴碱的参考色谱图见图1。 0.005 葫芦巴碱 0.004 0.003 0.002 0.001 0.000 0.00 2.00 4.00 6.00 8.00 10.00 12.00 14.00 16.00 18.00 保留时间（min） 图12mg/L葫芦巴碱标准溶液参考色谱图 行业标准信息服务平台 3 NY/T3012—2016 10000—换算系数。 计算结果保留3位有效数字。 9 精密度 在重复条件下同一样品获得的测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的15%。 10 参考色谱图 葫芦巴碱的参考色谱图见图1。 0.005 葫芦巴碱 0.004 0.003 0.002 0.001 0.000 0.00 2.00 4.00 6.00 8.00 10.00 12.00 14.00 16.00 18.00 保留时间（min） 图12mg/L葫芦巴碱标准溶液参考色谱图 行业标准信息服务平台 3 NY/T3012—2016 10000—换算系数。 计算结果保留3位有效数字。 9 精密度 在重复条件下同一样品获得的测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的15%。 10 参考色谱图 葫芦巴碱的参考色谱图见图1。 0.005 葫芦巴碱 0.004 0.003 0.002 0.001 0.000 0.00 2.00 4.00 6.00 8.00 10.00 12.00 14.00 16.00 18.00 保留时间（min） 图12mg/L葫芦巴碱标准溶液参考色谱图 行业标准信息服务平台 3